jurnal 8

Anti-angiogenic activity of inositol hexaphosphate (IP6)

Ivana Vucenik1,2, Antonino Passaniti2,3, Michele
I.Vitolo3, Kwanchanit Tantivejkul2, Paul Eggleton4
and AbulKalam M. Shamsuddin2,5

1Department of Medical and Research Technology, 2Department of Pathology
and 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of
Maryland School of Medicine, Baltimore, MD, USA and 4Peninsula Medical
School, Universities of Exeter and Plymouth and MRC
Immunochemistry Unit, University of Oxford, Oxford, UK

Aktivitas anti-angiogenik Hexaphosphate inositol
Sebuah aktivitas antikanker yang signifikan dari alamiInositol Hexaphosphate karbohidrat (IP6) telahdilaporkan terhadap model kanker banyak. Karena tumormembutuhkan angiogenesis untuk pertumbuhan dan metastasis, kamiberhipotesis bahwa IP6 mengurangi pertumbuhan tumor dengan menghambatangiogenesis. Karena angiogenesis tergantung pada interaksiantara sel-sel endotel dan tumor, kami menelitiefek IP6 pada keduanya. IP6 menghambat proliferasi dandiinduksi diferensiasi sel endotel in vitro, yangpertumbuhan sel endotel aorta sapi (BAECs) dievaluasioleh MTT assay proliferasi terhambat dalam dosedependentcara (IC50 ¼ 0,74 mM). KombinasiIP6 dan vasostatin, sebuah fragmen calreticulin dengan antiangiogenikkegiatan, itu sinergis unggul dalam pertumbuhanpenghambatan dari baik majemuk. IP6 menghambat manusiavena umbilikalis sel (HUVEC) pembentukan tabung endotel(In vitro kapiler diferensiasi) pada ekstraseluler dilarutkanmatriks, Matrigel, dan mengganggu pre-formed tabung.IP6 secara signifikan mengurangi faktor pertumbuhan fibroblast dasarPembentukan pembuluh (bFGF)-diinduksi (P 5 0,01) in vivo padaMatrigel pasang assay. Paparan HepG2, sebuah hepatoma manusiagaris sel, untuk IP6 untuk 8 jam, menghasilkan tergantung dosispenurunan tingkat mRNA endotel vaskularfaktor pertumbuhan (VEGF), sebagaimana dinilai oleh RT - PCR. IP6 pengobatandari HepG2 sel selama 24 jam juga berkurang secara signifikantingkat protein VEGF dalam medium AC, dalamtergantung konsentrasi cara (P ¼ 0,012). Dengan demikian, IP6memiliki efek penghambatan pada induksi angiogenesis.PengantarInositol Hexaphosphate (IP6, InsP6) di mana-mana pada tanaman,seperti sereal dan kacang-kacangan, dan ditemukan di sebagian besar mamaliaSel-sel pada konsentrasi 10 mM sampai 1 mM (1,2). Diakui sebagaiantioksidan kuat (3), IP6 juga telah ditunjukkan untuk memainkanperan penting dalam neurotransmisi (4), regulasi vesikelperdagangan dan daur ulang (5), dan endo-dan eksositosis (6).Kegiatan ini dimediasi oleh protein kinase C (6), modulasidari masuknya kalsium ditambah dengan penghambatan fosfatase(7), dan efisien messenger RNA ekspor (8,9). AFungsi antikanker novel IP6 telah ditunjukkan baikin vivo dan in vitro (10 - 12), bertindak terutama melalui regulasipertumbuhan sel dan diferensiasi sel (10 - 14). PotensiIP6 untuk mengurangi insiden tumor dan beban tumor telah terbuktidalam tikus tumor mammae (15-18), tumor kolon (19 - 23)dan pada model eksperimen lain, termasuk ditransplantasikandan metastasis fibrosarcoma (24), rhabdomyosarcoma (25)dan hepatoma (26,27). IP6 hadir berlimpah dalam mamaliasel, adalah komponen dari diet teratur, aman dan efisiendiserap dari saluran pencernaan (1,28,29), dan, karena itu,merupakan pencegahan yang sangat baik dan terapeutikkandidat untuk berbagai tumor. Namun, semua studi menanganitindakan antikanker IP6 telah dilakukan dengan ganassel epitel, dengan tidak ada laporan yang diterbitkan efekIP6 pada sel endotel pembuluh darah dan angiogenesis.Angiogenesis adalah proses pembentukan pembuluh darah yangterjadi dalam kondisi fisiologis dan patologis, dalamtertentu, angiogenesis dikaitkan dengan pertumbuhan progresifdan metastasis tumor padat, yang tergantung pada perekrutanpembuluh darah baru (30-33). Induksi vaskularisasi tumordimediasi oleh pelepasan faktor angiogenik.Diantara faktor-faktor tersebut, faktor pertumbuhan endotel vaskular(VEGF) dianggap yang paling spesifik (34). VEGFdisekresikan oleh sel-sel tumor, dan meningkatkan proliferasisel endotel dan renovasi dari neo-kapal. Sejaksel endotel dapat berkomunikasi secara langsung dengan sel-sel tumoroleh faktor-faktor produksi mempromosikan pertumbuhan, antar-hubunganantara sel-sel endotel dan tumor dan ketidakseimbanganantara faktor angiogenik dan inhibitor angiogenik dapat mempromosikanvaskularisasi tumor. Identifikasi novel angiogenikinhibitor yang menargetkan baik berkembang biak endotel dankompartemen sel tumor mungkin, karena itu, menyebabkan terapeutikregulasi pertumbuhan tumor.Beberapa inhibitor angiogenik yang mengatur endotel vaskularproliferasi sel dengan menargetkan faktor angiogenik atau merekareseptor telah dikembangkan (34,35). Thalidomide (36 - 38)dan TNP-470 (39,40), penghambat pertumbuhan sel endotel, yangdalam percobaan klinis. VEGF, reseptor VEGFR-2, dan novelkecil-molekul inhibitor VEGFR-2, seperti SU5416, yangSaat ini target dari upaya intens untuk menghambat disregulasipembentukan pembuluh darah pada kanker (35). Angiostatin, internalfragmen plasminogen berisi empat kringle domain (41)dan endostatin, sebuah fragmen C-terminal kolagen XVIII darihemangioendothelioma (42), adalah inhibitor endogenangiogenesis. Selain itu, sejumlah senyawa denganaktivitas anti-angiogenik telah berasal dari tanaman, sepertisebagai genistein, isoliquitrin dan ginsenosida. Baru-baru ini antiangiogenikpotensi sylmarin, flavonoid polifenolantioksidan terisolasi dari milk thistle, Silybum marianum (L.)Gaertn (43), torilin, terisolasi dari Torilis japonica (44) dankatekin dari ekstrak teh hijau (45) telah dilaporkan.Dalam penelitian kami, kami mengevaluasi aktivitas anti-angiogenikIP6. Kami berhipotesis bahwa IP6 menghambat angiogenesis tumor denganmempengaruhi baik sel endotel pembuluh darah dan sel-sel tumor. Kamimelaporkan bahwa IP6 mengurangi angiogenesis in vivo dan menghambatproliferasi dan diferensiasi sel-sel endotel in vitro.Perkembangan terapi anti-angiogenik lebih suksesmemerlukan perawatan gabungan diarahkan ke kompartemen selular yang berbeda.Oleh karena itu, kami selanjutnya diuji IP6 dalam kombinasidengan vasostatin, fragmen calreticulin kecil, dengan antiangiogenikSifat diarahkan terutama untuk sel endotel(46-48), dan menemukan bahwa kombinasi dari IP6 dan vasostatinadalah sinergis unggul dalam penghambatan pertumbuhan dari masing-masingsenyawa sendiri. Selain itu, kami melaporkan tindakan penghambatandari IP6 pada sekresi sitokin angiogenik primer,VEGF, dengan garis sel kanker hati manusia.Bahan dan metodeJalur sel dan kultur selVena umbilikalis manusia sel endotel (HUVECs), diperoleh dari Clonetics(San Diego, CA), dipelihara dan disebarkan di Medium 199 (E) mengandung10% serum janin sapi (FBS), 2 mM L-glutamin, 50 mg / ml sapiekstrak hipofisis (Gibco BRL Hidup Techonologies, Gaithersburg, MD),10 ng / ml EGF (Gibco BRL) dan 50 mg / ml gentamisin (Gibco BRL).HUVECs digunakan antara ayat-ayat 4 dan 10. Retrovirus HUVEC telomerized(HRVT) sel diciptakan di laboratorium kami dari kulit manusiasel endotel mikrovaskuler seperti yang dijelaskan sebelumnya (49). Sel yang HRVTdigunakan antara ayat-ayat 20 dan 30, dan dipelihara dan tumbuh di Medium199 (E) (Gibco BRL). Sel-sel ini setara dengan bagian awalHUVECs. Bovine sel endotel aorta (BAECs), dari Coriell (Camden,NJ) dan HepG2, garis sel hepatoblastoma manusia, yang diperoleh dari AmerikaKoleksi Budaya Tipe (Rockville, MD) ditumbuhkan dalam media DMEM(Gibco BRL) ditambah dengan 10% FBS, 2 mM L-glutamin, 50 U / mlpenisilin dan 50 mg / ml streptomisin. Kultur sel tetap dipertahankan dalamdilembabkan 37? C inkubator dengan 5% CO2.IP6IP6, sebagai garam dodecasodium dari beras (Sigma Chemical, St Louis, MO), adalahdisiapkan sebagai larutan stok 100 mM dalam air suling pada pH 7,4. Saham inisolusi telah terdilusi menjadi konsentrasi yang diinginkan dengan medium kultur.Segar IP6 larutan stok disiapkan sebelum digunakan.VasostatinVasostatin dimurnikan dan dinyatakan sebagai dijelaskan sebelumnya (50). Singkatnya, sebuahprotein (MBP) sistem fusi bakteri maltosa mengikat digunakan untuk mengekspresikanprotein rekombinan, strain bakteri Escherichia coli BL21 adalah (lDE3), danplasmid PMAL-c2. Vasostatin adalah N-domain calreticulin manusia (residu1-180). P-domain calreticulin (residu 181-290) (PDN) dan MBP2(MBP) (New England Biolabs, Hitchin, Hertfordshire, Inggris) diuji sebagaimengontrol protein. Semua protein didialisis dalam endotoksin bebas air yang mengandung10 mM NaCl dan beku-kering.Pertumbuhan uji inhibisiUntuk mengevaluasi efek IP6 pada proliferasi BAECs, seorang kolorimetriMTT digunakan seperti yang dijelaskan sebelumnya (13,25,26). Uji ini mengukurpengurangan garam tetrazolium, MTT ([4,5-dimethylthiazol-2-il] -2,5-diphenyltetrazoliumbromide)(Sigma), oleh sel hidup ke formazan berwarna biruproduk, mengevaluasi mitokondria serta aktivitas anti-proliferasi.Sel berlapis dalam piring mikro 96-(Sarstedt, Newton, NC) dikepadatan 2? 103 ml cells/well/100 dan diperlakukan baik dengan berbagai konsentrasidari IP6, mulai dari 0,1 sampai 3,0 mM, atau vasostatin, mulai dari 0,1 sampai10 mg / ml, atau kombinasi mereka. Setelah 1, 3 dan 5 hari pengobatan, 50 mlMTT (1,0 mg / ml) ditambahkan, dan inkubasi dilanjutkan selama 4 jam pada 37? C. Ituendapan formazan dilarutkan dengan 150 ml DMSO (Sigma) danabsorbansi ditentukan pada 540 nm. The MTT assay dilakukan denganBAECs tumbuh di hadapan atau tidak adanya faktor pertumbuhan fibroblast dasar(BFGF) (10 mg / ml). Mean dan standar deviasi dari data yang rangkap tigapoin. Percobaan independen yang diulang tiga kali.Uji efisiensi PlatingBAECs yang diunggulkan di piring kultur jaringan 10-cm (Sarstedt) dengan kepadatan5? 103 sel / piring dan diinkubasi pada 5% CO2 selama 10 hari. Medium pertumbuhanberbagai konsentrasi yang terkandung dari salah IP6 (mulai dari 0,1 sampai 3,0 mM) atauvasostatin (berkisar antara 0,1 hingga 10 mg / ml) atau kombinasi mereka, untuk kontrol,BAECs dengan densitas yang sama yang berlapis dalam hidangan yang mengandung medium pertumbuhansaja. BAECs yang diunggulkan di triplicates, dan percobaan ini diulangtiga kali.Pembentukan tabung kapiler pada Matrigel (in vitro angiogenesis)Dalam percobaan menilai efek penghambatan IP6 terhadap pembentukan tabung kapiler,HUVECs dan HRVT sel dikultur dalam piring 24-baik pada 0,2 mllapisan sebelumnya dipolimerisasi Matrigel (Becton Dickinson, Bedford, MA)dengan atau tanpa IP6, seperti yang dijelaskan sebelumnya (51). HUVECs yang berlapis dirangkap tiga dengan kepadatan 105 sel / sumur, sementara sel HRVT yang diunggulkan antara7 dan 8? 104 sel / sumur. Dalam pengujian ini, sel-sel melampirkan dalam waktu 30 menit, menjadipertumbuhan ditangkap, bermigrasi, mengeluarkan protease untuk menyerang ke gel, dan bentukantar-menghubungkan jaringan dalam waktu 6 jam. Lengkap diferensiasi biasanyadicapai setelah 18 - 24 jam. Jaringan yang stabil selama beberapa hari, setelah ituregresi dan agregasi terjadi. Perubahan morfologi sel dipengaruhi olehkehadiran IP6, ditangkap setelah 4 dan 22 jam melalui fase kontrasmikroskop (? 40) (Zeiss Axiovert 10, Jerman) dan difoto denganCCD kamera video. Untuk meneliti efek IP6 pada pre-formed tabung,HUVECs dan sel HRVT yang unggulan ke Matrigel selama 6 jam untuk membentuk dasartabung, maka media diganti dan IP6 ditambahkan. Tabungmorfologi diamati dari waktu ke waktu, dan gambar perwakilan diambil24 jam setelah dimulainya IP6 pengobatan. Percobaan independen yangdiulang dua kali.In vivo tikus Matrigel pasang assayMouse Matrigel pasang assay dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya olehPassaniti et al. (52). IP6 (2,0 mM) dan bFGF (400 ng / ml) dalam PBS dicampurdengan Matrigel (Becton Dickinson, Bedford, MA) dalam proporsi yang tidak melebihi1% dari total volume Matrigel. Campuran 0,5 ml Matrigel dengan IP6 ataukendaraan dan / atau bFGF diinjeksikan s.c. ke C57BL / 6 J tikus. Penelitian inidisetujui oleh University of Maryland School of Medicine dan Perawatan HewanGunakan Komite, dan dilakukan sesuai dengan peraturan yang berlaku danstandar dari NIH dan pedoman institusional kami untuk perawatan hewan. Sejak IP6merupakan senyawa larut dalam air yang mungkin menyebar dengan mudah dari colokan, untuk memastikaneksposur yang memadai untuk IP6, kelompok eksperimen juga diberikan IP6 diair minum (2% b / v, 15 mM), seperti yang dijelaskan sebelumnya (15 - 17,19 - 21).Setelah 5 - 7 hari, tikus dibunuh, dan colokan Matrigel dipotong difiksasidan bernoda menggunakan metode Masson-Trichrome. Percobaan itudiulang dua kali menggunakan 5 ekor / titik data. Untuk analisis kuantitatif angiogenesisdi colokan Matrigel, sistem digital komputerisasi dan NIH Gambar-1 softwaredigunakan pada foto yang diambil sebagai file TIF. Relatif angiogenikTanggapan dievaluasi dari kepadatan selular setiap slide setelah latar belakangpengurangan.VEGF sekresi oleh sel kankerProduksi faktor angiogenik VEGF dalam menanggapi IP6 pengobatandiukur dalam HepG2 sel. Untuk mempelajari pengaruh IP6 pada produksi danekspresi VEGF mRNA, kami menggunakan reverse transkripsi - berantai polimerasereaksi (RT - PCR) (53). RNA total diisolasi dari sel diperlakukan HepG2dengan IP6 setelah 8 dan 24 jam menggunakan RNAzol (Tel-Test, Friendswoods, TX) ekstraksiProsedur menurut protokol pabrik. Untuk kontrol positif,Total RNA diekstraksi dari garis sel karsinoma prostat, LNCaP.RT - PCR digunakan untuk memperkuat cDNA. Setelah reaksi RT dengan SuperscriptII reverse transcriptase (Gibco BRL), PCR digunakan untuk mengidentifikasi adanyaIsoform VEGF dalam sampel RNA. Primer yang digunakan untuk uji amplifikasiadalah modifikasi dari yang diterbitkan sebelumnya. Karenaprimer memulai dalam ekson pertama dan mengakhiri dalam ekson kedelapanVEGF-A, mereka memungkinkan amplifikasi semua dikenal VEGF varian sambatan.Urutan oligonucleoide dari primer yang digunakan adalah: 50 awal manusia ekson1, 50 TGC ACC CAT GGC AGA AGG Agg 30; 30 akhir manusia ekson 8,50 TCA CCG CCT CGG CTT GTC ACA 30.PCR dilakukan dengan Taq DNA polimerase (Boehringer MannheimBiokimia, Indianapolis, IN) dengan DNA Thermal Cycler (Perkin ElmerCetus, Norwalk, CT) sebagai berikut: 94 C selama 7 menit, kemudian 35 siklus denaturasi?pada 94? C selama 1 menit, annealing dan ekstensi pada 72? C untuk setiap 1 menit. PCRProduk dianalisis dengan elektroforesis pada gel agarosa 2% yangkemudian diwarnai dengan ethidium bromida untuk visualisasi pita DNA.Sebuah DNA tangga penanda berat molekul 100 bp-(Boehringer MannheimBiokimia) digunakan untuk memberikan referensi ukuran untuk reaksi uji. Itusampel dijalankan dalam duplikat untuk setiap titik waktu. Percobaan itudilakukan dua kali secara independen.DiskusiAngiogenesis memainkan peran sentral dalam berbagai fisiologisdan kondisi patologis, seperti kanker, pembuluh darah, arthritisdan penyakit lainnya. Karena kehadiran memadaisuplai darah diperlukan untuk pertumbuhan dan metastasistumor ganas, penghambatan tumor-angiogenesis diinduksimerupakan target yang menjanjikan untuk terapi anti-neoplastik;dengan demikian, agen angiogenesis penekan dapat memberikan barumodalitas pengobatan antitumor (35). Ini agen baru dapatmengobati tidak hanya kanker, tapi penyakit lainnya yang melibatkan hyperangiogenesis.Meskipun sejumlah inhibitor farmakologiberada di bawah penyelidikan, toksisitas mungkin dan kebutuhanuntuk dosis kronis mendikte mencari agen baru dengan rendahtoksisitas yang efektif dan aman untuk penggunaan jangka panjang. Baru-baru inidiamati bahwa serangkaian zat diusulkan sebagaiagen pencegah kanker yang mungkin menunjukkan anti-angiogeniksifat, sehingga suatu konsep baru 'angioprevention' adalahdiusulkan (58).IP6, karbohidrat alami yang berlimpah dalam makanan,memiliki aktivitas pencegahan dan terapi kanker yang signifikan(10 - 27). Seiring dengan penghambatan proliferasi sel, IP6meningkatkan diferensiasi sel ganas untuk lebih dewasasel, sering mengakibatkan pembalikan ke fenotipe yang normal(1,10 - 12, 25,26). Dalam studi ini, kami meneliti antiangiogenikpotensi IP6, yang kritis dapat berkontribusiuntuk keberhasilan kanker yang preventif dan terapeutik. Kami menunjukkanbahwa IP6 dapat menargetkan endotel dan sel-sel kanker. Data kamimenunjukkan bahwa IP6 menghambat pertumbuhan dan diinduksidiferensiasi sel endotel vaskular, dan menghambatsekresi faktor angiogenik VEGF dengan ganassel epitel.IP6 menghambat FGF-dirangsang angiogenesis in vivo, yangmenunjukkan bahwa IP6 dapat menekan angiogenesis abnormal.Dalam penghambatan in vitro pertumbuhan sel endotel oleh IP6 tambahanmenyiratkan IP6 yang menghambat angiogenesis berlebihan melalui inirute juga, karena proliferasi sel endotel sangat penting untukkapiler tumbuh. Selanjutnya, IP6 menghambat dan mencegahpembentukan jaringan pembuluh darah dari HUVECs di tempat tidur Matrigelin vitro. Penting untuk dicatat bahwa efek penghambatanIP6 pada pembentukan tabung diamati apakah pengobatan itudimulai simultan dengan sel pembibitan pada Matrigel atausetelah tabung telah terbentuk. Kemampuan IP6 untuk menggangguintegritas pre-formed tabung menunjukkan IP6 yang mungkin tidak hanyamencegah, tetapi juga mundur pembuluh darah baru. Pembentukan kapiler adalah proses yang membutuhkan sel yang kompleks - matriksinteraksi, komunikasi antar-sel, serta selmotilitas, sehingga pembentukan jaringan berkurang mungkin menunjukkanpenghambatan lampiran, migrasi dan invasisel endotel. Pekerjaan sedang berlangsung untuk menjelaskan efekdari IP6 pada proses ini. Selanjutnya, hasil divivo Matrigel assay angiogenesis, menunjukkan secara signifikan lebih kecilbusi, mengandung infiltrasi sel jauh lebih sedikit pembuluh darah,menunjukkan bahwa penghambatan proliferasi sel endotel mungkinmenjadi pusat menekan angiogenesis dan pertumbuhan tumor denganIP6. Meskipun tidak ada racun atau morfologi yang berbeda terkaitdengan apoptosis sel endotel dapat dideteksi, kita tidaktermasuk kemungkinan bahwa pada dosis lebih tinggi mungkin menyebabkan IP6apoptosis (59) dari sel-sel endotel, juga.Di samping efek penghambatan pada tanggapansel endotel, dan in vivo dan in vitro angiogenesis, IP6diberikan tindakan penghambatan pada sekresi angiogeniksitokin. Angiogenesis dapat dihambat, dan akibatnyapertumbuhan tumor dapat dikurangi, dengan menghalangi induksiVEGF atau FGF (34). VEGF menginduksi angiogenesis di keduasituasi patologis dan fisiologis, tetapi memiliki spesifisitas yang sempit,dan bertindak dengan efek mitogenik dan chemotactic spesifikpada sel endotel vaskular, sehingga meningkatkan proliferasi merekadan permeabilitas.Di sini kita telah meneliti efek IP6 pada sekresiVEGF dari HepG2 sel, sel-sel kanker hati manusia dan menemukanbahwa IP6 mengurangi ekspresi VEGF mRNA dan protein.Baru-baru ini, Singh et al. (60) juga melaporkan penghambatanVEGF oleh IP6 dalam model tumor prostat. FGF lain adalahFaktor terlibat dalam pertumbuhan tumor dan angiogenesis. Morrisonet al. (61) meneliti efek IP6 pada FGF dan menemukan bahwaIP6 adalah antagonis ampuh FGF seluler mengikat dan aktivitas.Mereka menganggap kegiatan ini untuk konformasi kursiIP6, yang meniru bahwa struktur cincin piranosa dariheparin. Menariknya, VEGF juga merupakan pengikat heparinfaktor angiogenik.Kami telah menunjukkan sebelumnya bahwa IP6 efektif dalampengobatan kanker hati in vitro dan in vivo pada tikus telanjang(26,27). Sebuah penghambatan pertumbuhan tergantung dosis HepG2 seldiinduksi oleh IP6 in vitro (26), dan pengurangan transplantasipertumbuhan tumor pada tikus hepatoma diberikan intra-tumoralsuntikan IP6 (27). Dalam model rhabdomyosarcoma manusia,IP6-diperlakukan tikus telanjang menghasilkan 25-49 kali lipat lebih keciltumor bila dibandingkan dengan kontrol (25). Oleh karena itu,mungkin bahwa IP6, dengan mencabut endotelium tumor VEGFdan FGF, dapat mengganggu pembentukan pembuluh darah baru dengan menghambatsekresi faktor angiogenik yang menyebabkan pertumbuhan tumorpenghambatan. Tingginya tingkat basal VEGF mRNA telahterdeteksi pada karsinoma hepatoseluler dari pada jaringan normal,termasuk isoform VEGF utama 121 dan 165 (62). TigamRNA isoform VEGF diekspresikan dalam HepG2 sel.Peningkatan ekspresi VEGF dan VEGF 121, 165 dan 189isoform mRNA dikaitkan dengan perkembangan tumor padakarsinoma hepatoseluler (62) dan pembentukan hatimetastasis dengan prognosis buruk (sebesar 62,63). Hal ini penting untukdicatat bahwa IP6 secara dramatis turun-diatur ekspresiketiga VEGF mRNA isoform. Data lebih lanjut menimbulkan pertanyaantentang kemungkinan efek dari IP6 pada VEGF steady-statetingkat dan dalam kondisi eksperimen yang berhubungan denganover-ekspresi VEGF, seperti hipoksia. Hipoksia dapatterdeteksi di daerah pusat tumor, dan merupakan pentingstimulus untuk pembentukan pembuluh baru. Hal ini juga terlibat kritisdalam proses metastasis. Hipoksia up-mengatur VEGFekspresi sebagian melalui peningkatan transkripsi mRNA:dalam tumor, VEGF mRNA co-melokalisasi ke daerah hipoksia(57). The gen VEGF dan beberapa gen lain yang diatur olehhipoksia berada di bawah kendali dari faktor hypoxia-inducible(HIF) -1, faktor transkripsi (64). Oleh karena itu, akan menjadi pentinguntuk menyelidiki efek IP6 pada HIF-1 berekspresi danfungsi dalam hipoksia.Beberapa mekanisme molekuler dapat disarankan untukmengamati efek anti-angiogenik IP6 dan penghambatanEkspresi VEGF. IP6 dapat down-mengatur VEGF actinglangsung, atau tidak langsung dengan menghambat ekspresi faktorup-stream VEGF. Berbagai jalur transduksi sinyaltelah terlibat dalam angiogenesis, dan dalam regulasiangiogenik ekspresi faktor. Phosphatidylinositol 30-kinase(PI3K) / Akt adalah jalur sinyal umum untuk onkogen dangen supresor tumor dan terlibat dalam VEGF dan HIF-1regulasi (64). Aktivasi Erk1 dan ERK2 juga telahterbukti menjadi mediator penting untuk up-peraturan VEGF(65,66). Meskipun kedua jalur telah terbukti dihambatoleh IP6 (59,67 - 69), studi lebih lanjut diperlukan untuk menentukanlebih tepatnya mekanisme aksi anti-angiogenik IP6terkait dengan jalur ini. Potensi IP6 untuk menghambat PI3Kmungkin terkait dengan struktur, karena IP6 mirip dengan D-3-deoksi-3-fluoro-PtdIns, inhibitor PI3K (67). Namun, IP6 adalahjuga dikenal sebagai chelator ion logam yang kuat (1 - 5), dan dapatmenghambat metalloproteinase, yang diperlukan untuk kapilertumbuh (70). Selain itu, karena beberapa kinase reseptor tergantungpada kation divalen untuk aktivitas mereka, IP6 bisa menghambat aktivitaskinase ini dengan pengkhelat kation divalen, mempengaruhibaik Erks dan jalur PI3K/Akt. Tingginya tingkat basalmRNA dan protein dari kedua VEGF dan pertumbuhan seperti insulinFaktor-II (IGF-II), faktor angiogenik lain, dapat dideteksipada karsinoma hepatoseluler relatif terhadap jaringan normal (62). Karet al. (71) menunjukkan interaksi antara IP6 dan IGF-IIsitus mengikat reseptor di otak tikus. Telah dilaporkan bahwakombinasi hipoksia dan IGF-II menginduksi VEGFmRNA (72), dan bahwa IGF-II dapat up-mengatur HIF-1 protein;Oleh karena itu, adalah mungkin bahwa IP6 mengganggu IGF-II mungkinlebih berkontribusi pada diamati down-regulasi VEGF.Terapi Kanker yang menggabungkan inhibitor berbeda angiogenesisadalah sebuah novel, strategi yang efektif untuk eksperimentalpengobatan kanker. Untuk mengembangkan lebih sukses antiangiogenikterapi, pengobatan kombinasi, diarahkan untuk berbedakompartemen selular mungkin penting. Diharapkan bahwakombinasi dari inhibitor angiogenesis dengan sitotoksikdan membedakan agen kemoterapi akan secara signifikanmeningkatkan kelangsungan hidup dan kualitas hidup bukan hanya pasien kanker,tetapi juga orang lain dipengaruhi oleh peningkatan angiogenesis.Sebagai kesimpulan, penelitian ini menunjukkan bahwa IP6 memiliki tindakan penghambatanpada beberapa tanggapan angiogenik, termasuk pertumbuhan dandiferensiasi sel endotel, serta penghambatanefek pada sekresi VEGF, sitokin angiogenik kunci.Ini aktivitas anti-angiogenik, dikombinasikan dengan sebelumnyadiketahui potensi IP6 sebagai kuat anti-proliferasi danagen diferensiasi-merangsang, memberikan bukti bahwa IP6 adalahberguna untuk pencegahan dan terapi kanker dan kondisi lainangiogenesis yang berlebihan pada manusia, dan manfaat lebihinvestigasi.(andini marisyah putri)